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Prof. Dr. Robson Maia Franco

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CEPAS DE Escherichia coli E SUA IMPORTÂNCIA EM CONTROLE DE QUALIDADE DE PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL

Postado por Microbiologista segunda-feira, 1 de fevereiro de 2010

CEPAS DE E.coli E SUA IMPORTÂNCIA EM CONTROLE DE QUALIDADE DE PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL

INTRODUÇÃO

CARACTERÍSTICAS GERAIS: BGN – FAMÍLIA – COLIFORME FECAL – E.coli – EPEC

SIGNIFICADO E. coli EM P.O.A – DOIS PRISMAS
 CONTAMINAÇÀO BACTERIANA DE ORIGEM FECAL - HIGIENE INSATISFATÓRIA
 CEPAS COMPROVADAMENTE PATOGÊNICAS AOS HOMENS E ANIMAIS

CLASSIFICAÇÃO: BASEADA EM VIRULÊNCIA, MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS, EPIDEMIOLOGIA

ANTÍGENOS: SOMÁTICOS O – POLISSACARÍDEOS – MEMBRANA EXTERNA: 173
FLAGELADOS H – PROTEÍNAS – FLAGELOS: 56
CAPSULARES K – POLISSACARÍDEOS – CÁPSULA: 100

A) EPEC (E.coli ENTEROPATOGÊNICA CLÁSSICA)
B) EIEC (E.coli ENTEROINVASORA)
C) ETEC (E.coli ENTEROTOXIGÊNICA)
D) EHEC (E.coli ENTEROHEMORRÁGICA)
E) EaggEC (E. coli ENTEROAGREGATIVA) OU EAEC - POUCOS DADOS DISPONÍVEIS

• FEEC (E. coli FACULTATIVAMENTE PATOGÊNICA)- SURTOS ESPORÁDICOS DE DIARRÉIA - PATOGENICIDADE NÃO COMPROVADA
• DAEC (E. coli DIFUSIVAMENTE ADERENTE) - AINDA NÃO CARACTERIZADAS
• UPEC (E. coli UROPATOGÊNICA)
• NMEC (E. coli NEO NATAL MENINGITE)

BREVE HISTÓRICO


.MEADOS DE 1940 – EPIDEMIA EM CRECHE – MORTALIDADE 50%
1950 – ISOLAMENTO  RESPOSTAS NA PROVA DE ALÇA INTESTINAL DE COELHO COM SEMELHANÇA AO Vibrio cholerae - CÓLERA NA ÍNDIA
 1967 – CEPAS ENTEROTOXIGÊNICAS - ANIMAIS JOVENS COM DIARRÉIA
 1970 – CEPAS VIRULENTAS PRODUZINDO ENTEROTOXINAS
* 1970 – EUA – GASTROENTERITE - QUEIJO IMPORTADO – IDEALIZAÇÃO DE MÉTODOS ‘IN VITRO” ESPECÍFICOS E SEGUROS, E MÉTODOS DE BIOENSAIO NA AVALIAÇÃO DE COMPONENTES TÓXICOS E COMPREENSÃO DOS MECANISMOS DE VIRULÊNCIA

EPEC

CARACTERÍSTICAS DO MICRORGANISMO
•GASTROENTERITE EM CRIANÇAS (LACTENTES, RECÉM NASCIDOS)/IDOSOS
•ADULTOS PODEM SER PORTADORES
•NÚMERO RESTRITO DE SOROTIPOS
•SOROGRUPOS: 026, 055, 086, 0111, 0114, 0119, 0125, 0126, 0127, 0128 ab, 0142 e 0158.

CARACTERÍSTICAS DA DOENÇA

.RECÉM NASCIDOS E LACTENTES JOVENS  MAIS SUSCEPTÍVEIS
•SINTOMAS: DIARRÉIA GRAVE, DORES ABDOMINAIS, VÔMITOS, FEBRE
•DURAÇÃO:SEIS HORAS A TRÊS DIAS (MÉDIA DE 24 HORAS)
•PERÍODO DE INCUBAÇÃO: 17 A 72 HORAS (MÉDIA DE 36 HORAS)

MECANISMO DE PATOGENICIDADE

•VIRULÊNCIA  ADESÃO À MUCOSA INTESTINAL, DESTRUIÇÃO DAS MICROVILOSIDADES DAS CÉLULAS EPITELIAIS INTESTINAIS. PRODUÇÃO TOXINA “Shiga”. ?
•ADESÃO MEDIADA POR PLASMÍDEO (eaf) - SÍNTESE DE FATOR DE ADERÊNCIA (EAF) – EAF (EPEC ADHERENCE FACTOR)
EAF - PROTEÍNA 50 A 70 KDa - TIPO DE ADESÃO AO ENTERÓCITO DENOMINADA LOCALIZADA (AL) CARACTERÍSTICA DE EPEC
•OUTRAS CEPAS - ADESÃO DIFUSA (AD)
•MICROSCOPIA ELETRÔNICA: PROFUNDAS ALTERAÇÕES NO CITOESQUELETO DAS CÉLULAS EPITELIAIS COM DESTRUIÇÃO DAS MICROVILOSIDADES E ACÚMULO DE ACTINA NO LOCAL DE ADESÃO - EFEITO "ATTACHMENT AND EFFACEMENT" = PROTEÍNA 94 KDa - INTIMINA -PRODUÇÃO MEDIADA POR UM GENE CROMOSSOMIAL (eae)
•GENS eae E eaf SÃO INTERDEPENDENTES

EPIDEMIOLOGIA

•PAÍSES DESENVOLVIDOS  SURTOS ESPORÁDICOS – FREQUÊNCIA MUITO BAIXA EM DIARRÉIA ENDÊMICA
•PAÍSES EM DESENVOLVIMENTO (ZONA TROPICAL) PRINCIPAL AGENTE NA DIARRÉIA DO LACTENTE – ALTA MORTALIDADE
•BRASIL – 30% DOS CASOS DE DIARRÉIA AGUDA – CRIANÇAS POBRES – IDADE INFERIOR A SEIS MESES – SOROTIPOS: 0111:[H-], 0111:[H2], 0119:H6, 055:H6
•CRIANÇAS IDADE SUPERIOR A 1 ANO - RARAMENTE AFETADAS
•INFECÇÕES EPEC ASSOCIADAS COM DIARRÉIA CRÔNICA
•ANOS 60-70 - SURTOS ÁGUA E/OU ALIMENTOS NO MUNDO – SOROGRUPOS 086, 0111 EM CRIANÇAS E ADULTOS

ANTIMICROBIANOTERAPIA

•DESNECESSÁRIA – AUTOLIMITANTE – QUANDO INDICADA – SELEÇÃO POR ANTIBIOGRAMA – SOROTIPOS FREQUENTEMENTE ISOLADOS RESISTENTES À MAIORIA DOS ANTIMICROBIANOS – PERIGO: SAÚDE PÚBLICA, EPIDEMIOLOGIA ANIMAL, AMBIENTAL.

EIEC

CARACTERÍSTICAS DO MICRORGANISMO

•CEPAS PENETRAM NAS CÉLULAS EPITELIAIS – MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS SEMELHANTES ÀS INFECÇÕES POR Shigella spp.
•PERFIL BIOQUÍMICO DIFERENTE DE OUTRAS CEPAS DE E. coli, PORÉM, SEMELHANTE A Shigella. EX: DESCARBOXILAÇÃO LISINA (-), LACTOSE (-) OU FERMENTAÇÃO TARDIA, AUSÊNCIA DE FLAGELOS (H-)
• SOROGRUPOS: 021, 028 ac, 029, 0112 c, 0124 (EQUIVALENTE A Shigella dysenteriae antisoro 3), 0136, 0143 (EQUIVALENTE A Shigella boydii antisoro 8), 0144, 0152 (EQUIVALENTE A Sh. Dysenteriae antisoro 12), 0164, 0167 e 0173.

CARACTERÍSTICAS DA DOENÇA

•GASTROENTERITE SEMELHANTE A SHIGELOSE (DISENTERIA BACILAR) – CRIANÇAS MAIORES DE DOIS ANOS E ADULTOS
•SINTOMAS: DISENTERIA, CÓLICAS ABDOMINAIS, FEBRE, MAL ESTAR GERAL, SANGUE E MUCO NAS FEZES
•PERÍODO DE INCUBAÇÃO: OITO A 24 HORAS (MÉDIA DE 11 HORAS)
•DOSE INFECTANTE: ALTA (1000000 A 100000000 CÉLULAS)
•DURAÇÃO: HORAS A DIAS ?
•CAPACIDADE INVASORA: TESTE SERENY – CERATOCONJUNTIVITE EM COBAIA ALBINA – CURA ESPONTÂNEA: DUAS A TRÊS SEMANAS

MECANISMO DE PATOGENICIDADE

•INVASÃO INICIADA PELA INTERNALIZAÇÃO DA EIEC PELO ENTERÓCITO (ENDOCITOSE) MODIFICAÇÃO DO CITOESQUELETO  INTERNALIZADA ROMPE O ENTERÓCITO - MULTIPLICAÇÃO -INVADE CÉLULAS VIZINHAS
.LOCAL DE INVASÃO: ACÚMULO DE ACTINA E COMPLETO DESARRANJO DA ESTRUTURA CELULAR E SUA MORTE.
•ATUALMENTE: PROTEÍNAS (IPA) – RESPONSÁVEIS PELA APROXIMAÇÃO DE EIEC AO ENTERÓCITO E INVASÃO. SÍNTESE PROTÉICA MEDIADA POR PLASMÍDEO (inv) EXPRESSÃO REGULADA POR GENES CROMOSSÔMICOS

EPIDEMIOLOGIA

•CRIANÇAS MAIORES DE DOIS ANOS E ADULTOS
ISOLAMENTO NÃO FREQUENTE DE PACIENTES COM DIARRÉIA
•SURTOS DE ÁGUA E/OU ALIMENTOS – SOROGRUPO 0124
•VIA DE TRANSMISSÃO MAIS COMUM: CONTATO INTERPESSOAL

TRATAMENTO

•CURA ESPONTÂNEA
•ANTIBIOTICOTERAPIA – CASOS GRAVES AMPICILINA
•SENSÍVEIS À MAIORIA DOS ANTIBIÓTICOS

ETEC

CARACTERÍSTICAS DO MICRORGANISMO

•PRODUZEM ENTEROTOXINAS
•NÚMERO LIMITADO DE SOROTIPOS DE E. coli ASSOCIADO COM REGULARIDADE A CASOS DE DIARRÉIA POR ETEC, ESPORADICAMENTE, OUTROS SOROTIPOS ESTÃO ENVOLVIDOS.
•SOROGRUPOS: 06, 08, 015, 020, 025, 027, 068, 078, 080, 085,0115, 0128ac, 0139, 0148, 0153, 0159, 0167

CARACTERÍSTICAS DA DOENÇA

•SINTOMAS: DIARRÉIA AQUOSA, FEBRE BAIXA, DORES ABDOMINAIS, NÁUSEAS
•FORMA MAIS SEVERA, SEMELHANTE À COLERA: FEZES AQUOSAS ‘ÁGUA DE ARROZ’, DESIDRATAÇÃO
•PERÍODO DE INCUBAÇÃO: OITO A 44 HORAS (MÉDIA 26 HORAS)
•DURAÇÃO: UM A DOIS DIAS OU MAIS
•DOSE INFECTANTE: ALTA (1000000 A 10000000 CÉLULAS)
•INDIVÍDUOS DESNUTRIDOS: GASTROENTERITE POR VÁRIAS SEMANAS, DESIDRATAÇÃO GRAVE
•DIARRÉIA DOS VIAJANTES: LEVE, NORMALMENTE AUTOLIMITANTE

MECANISMO DE PATOGENICIDADE

•VIRULÊNCIA: TOXINAS TERMOLÁBEIS E TERMOESTÁVEIS, FATORES DE ADESÃO
•CEPAS ADEREM A MUCOSA DO INTESTINO DELGADO E PRODUZEM TOXINAS - DIARRÉIA AQUOSA
•ADESÃO E COLONIZAÇÃO NA MUCOSA MEDIADAS POR ESTRUTURAS PROTÉICAS (FIMBRIAS) OU FATORES DE COLONIZAÇÃO DA SUPERFÍCIE BACTERIANA, CODIFICADAS POR PLASMÍDEOS.
•FATORES DE COLONIZAÇÃO ESPÉCIE-ESPECÍFICOS: FATORES DE ETEC HUMANA SÓ EM ETEC CAUSADORA DE DIARRÉIA HUMANA. FATORES DE ETEC DE SUÍNOS SÓ EXISTEM EM ETEC PATOGÊNICA PARA SUÍNOS.
•ETEC: ENTEROTOXINA TERMOLÁBIL (LT) E/OU ENTEROTOXINA TERMOESTÁVEL (ST)
•TERMOLÁBIL: INATIVADA A 60ºC/30 MINUTOS
•TERMOESTÁVEL: RESISTE 100ºC/30 MINUTOS
•TIPOS IMUNOLÓGICOS E GENETICAMENTE DISTINTOS DE LT

LT-I - ESTRUTURA E ANTIGENICIDADE SEMELHANTE À ENTEROTOXINA COLÉRICA, TOTALMENTE NEUTRALIZADA PELA TOXINA COLÉRICA, PROTEÍNA, PM=88 KDa
LT-II - NÃO NEUTRALIZADA PELA TOXINA COLÉRICA NEM PELA ANTITOXINA LT-I, PM=83KDa, VARIANTES LT-IIa E LT-Iib ANTIGENICAMENTE RELACIONADAS E ATIVIDADES BIOLÓGICAS DIFERENTES

•TOXINAS LT-I E LT-II - UMA SUBUNIDADE A E CINCO SUBUNIDADES B, ARRANJADAS EM FORMA DE ANEL ENVOLVENDO A SUBUNIDADE A
•SUBUNIDADES B - FIXAÇÃO À MUCOSA INTESTINAL POR RECEPTORES MONOSIALOGANGLIOSÍDICOS NA MEMBRANA EXTERNA DOS ENTERÓCITOS (GM1 - LT-1, GD1A - LTIIa e GD1B - LT-IIb)
•APÓS A FIXAÇÃO A SUBUNIDADE A É INTERNALIZADA PELO ENTERÓCITO, ONDE ESTIMULA A ADENILCICLASE - ACÚMULO DE AMP CÍCLICO INTRACELULAR - HIPERSECREÇÃO DE ÁGUA E ELETRÓLITOS (MENOR ABSORÇÃO DE Na+, MAIOR EXCREÇÃO DE CLORO E BICARBONATO DIARRÉIA AQUOSA.
•ALTERAÇÃO PROCESSOS SECRETÓRIOS E ABSORÇÃO DA MUCOSA INTESTINAL NÃO CAUSAM DANOS AOS TECIDOS, LOGO ENTEROTOXINAS SÃO CITOTÔNICAS E NÃO CITOTÓXICAS.
ENTEROTOXINA (ST)
-NÃO IMUNOGÊNICA, BAIXO PESO MOLECULAR (2KDa = PEPTÍDEO=TERMOESTABILIDADE
-TIPOS DISTINTOS DE ST
# ST-I OU Sta - POSSUI 17 A 19 AMINOÁCIDOSFIXA E ATIVA A GUANILCICLASE NA MEMBRANA APICAL DA CÉLULA INTESTINAL COM PRODUÇÃO ELEVADA E ACÚMULO INTRACELULAR DE GMP CÍCLICO AUMENTO DA SECREÇÃO DE CLORETO E REDUÇÃO NA ABSORÇÃO DE SÓDIO (ALTERAÇÕES NO METABOLISMO CELULAR E ATIVIDADES DAS BOMBAS IÔNICAS)

# STII OU STb PEPTÍDEO DIFERENTE DE ST-I - MECANISMO DE AÇÃO EM ESTUDO PARECE INTERFERIR NOS NÍVEIS INTRACELULARES DE CÁLCIO. PARECE SE RESTRINGIR À DIARRÉIA DE ANIMAIS.

•PRODUÇÃO DE ENTEROTOXINAS LT-I, ST-I, ST-II E ALGUNS FATORES DE COLONIZAÇÃO É CODIFICADA POR PLASMÍDEOS. PRODUÇÃO DE TOXINA LT-II É CODIFICADA POR GENS CROMOSSÔMICOS
•ETEC - ADEREM À MUCOSA DO INTESTINO DELGADO, NÃO ALTERAM VILOSIDADES, INFECÇÃO É SUPERFICIAL – BACTÉRIAS ADEREM SUPERFICIALMENTE – NÃO PENETRAM NO EPITÉLIO INTESTINAL - FEZES SEM LEUCÓCITOS, SANGUE OU MUCO.
•COLONIZAÇÃO INTESTINAL MEDIADA POR FÍMBRIAS, CONHECIDAS COMO FATORES DE COLONIZAÇÃO (CFA) - PROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS, TIPOS ANTIGÊNICOS (CFA/I, CFA/II, CFA/III...)
• ATUALMENTE: FÍMBRIA SEMIFLEXÍVEL FORMADORA DE FEIXES, DENOMINADA LONGUS (=CODIFICADA POR PLASMÍDEO, POLIPEPTÍDEO DE 22 KDa).

EPIDEMIOLOGIA

•IMPORTANTES CAUSAS DE DIARRÉIA EM PAÍSES EM DESENVOLVIMENTO
•REGIÕES ENDÊMICAS - SANEAMENTO PRECÁRIO, PRINCIPALMENTE NOS TRÓPICOS
•ATINGE TODAS AS FAIXAS ETÁRIAS
•DIARRÉIA DOS VIAJANTES - INDIVÍDUOS LOCOMOVEM ÁREAS DESENVOLVIDAS PARA REGIÕES COM PROBLEMAS DE SANEAMENTO BÁSICO
•EUA, EUROPA - CASOS ESPORÁDICOS PELO CONSUMO DE ÁGUA OU ALIMENTOS CONTAMINADOS

TRATAMENTO

•DISPENSAM ANTIMICROBIANOTERAPIA
•CASOS GRAVES – ANTIBIOGRAMA – RESISTÊNCIA MÚLTIPLA COM FREQUÊNCIA

EHEC OU VTEC E. coli VEROTOXIGÊNICA

ETIOLOGIA

•1982 – CDC INVESTIGAÇÃO – DOIS SURTOS DE DIARRÉIA SANGUINOLENTA SEVERA POR INGESTÃO DE ALIMENTO REDE ‘FAST FOOD’- IDENTIFICAÇÃO CEPA E.coli
•EXPRESSANDO ANTÍGENO SOMÁTICO (O)157 E FLAGELAR (H)7 ATÉ ENTÃO NÃO RECONHECIDO COMO PATÓGENO
•0157:H7 - PROTÓTIPO DE EHEC – COLITE HEMORRÁGICA (MICRORGANISMO EMERGENTE)
•INCLUSÃO 026:H11RECENTE PROPOSTA
•EXISTEM MAIS DE 50 SOROTIPOS DE EHEC
•PROPRIEDADES DIFERENCIAIS DAS DEMAIS CEPAS DE E coli:SORBITOL (-),BETAGLUCURONIDASE (-), DIFÍCIL MULTIPLICAÇÃO OU NÃO SE MULTIPLICAM NAS TEMPERATURAS EMPREGADAS PARA PESQUISA DE E.coli EM ALIMENTOS (44,5ºC/45,5C)

CARACTERÍSTICAS DA DOENÇA

•SINTOMAS: COLITE HEMORRÁGICA DORES ABDOMINAIS SEVERAS, DIARRÉIA AGUDA, DIARRÉIA SANGUINOLENTA (MUITO SANGUE NAS FEZES) E AUSÊNCIA DE FEBRE
•PERÍODO DE INCUBAÇÃO: TRÊS A NOVE DIAS (MÉDIA DE QUATRO DIAS)
•DURAÇÃO: DOIS A NOVE DIAS
•DOSE INFECTANTE: 2 A 2000 CÉLULAS/g ou Ml
•EVOLUÇÃO: CASOS GRAVES - SÍNDROME URÊMICA HEMOLÍTICA (SUH) FALHA RENAL - PÚRPURA TROMBOCITOPÊNICA TROMBÓTICA (PTT) - SNC, COÁGULOS CEREBRAIS - MORTE
•SUSCEPTÍVEIS: CRIANÇAS MENORES DE 10 ANOS, IDOSOS, IMUNODEPRIMIDOS

MECANISMO DE PATOGENICIDADE

•PRODUÇÃO DE CITOTOXINAS DENOMINADAS VEROTOXINAS (VTs) ATIVIDADE BIOLÓGICA EM CULTURA DE CÉLULAS VERO, ORIGINÁRIAS DE RIM DE MACACO
•TAMBÉM DENOMINADAS TOXINAS SHIGA-LIKE (SLT) POR SE ASSEMELHAREM À TOXINA DO BACILO SHIGA (Shigella dysenteriae tipo 1 DISENTERIA BACILAR)
•NOVA NOMENCLATURA: FAMÍLIA DAS TOXINAS Shiga (Stx) INCLUI E. coli QUE PORTAM O GENE Stx OU ELABORAM Stx SENDO REFERIDAS COM STEC (‘Shiga toxin-producing E.coli’)
•EHEC INGERIDA – SOBREVIVE pH ESTOMACAL – INTESTINO GROSSO – COLONIZA COMPETINDO COM MICROBIOTA INTESTINAL - PRODUZ Stx NO LUMEN ABSORÇÃO PELAS CÉLULAS DO EPITÉLIO INTESTINALCORRENTE SANGUÍNEA - DISTRIBUÍDA PARA RECEPTORES DAS CÉLULAS ALVO EFEITOS LOCAIS E SISTÊMICOS.
Stx – TOXINA TERMOLÁBIL - DUAS CLASSES ANTIGENICAMENTE DISTINTAS:
-Stx 1(VT-1 OU SLT-I) E STx2 (VT-2 OU SLT II) COM MESMAS PROPRIEDADES BIOLÓGICAS, MESMO GANGLIOSÍDEO RECEPTOR (Gb3), CODIFICADAS POR FAGOS LISOGÊNICOS DISTINTOS. RECENTEMENTE FOI DESCRITA A VT-3.
Stx1, Stx2 - POSSUEM UMA SUBUNIDADE A E CINCO SUBUNIDADES B
•SUBUNIDADES B - LIGAÇÃO DA TOXINA AO GANGLIOSÍDEO (Gb3) NA CÉLULA HOSPEDEIRA
•SUBUNIDADES A - PORÇÃO ENZIMÁTICA ATIVA DA MOLÉCULA (FRAGMENTO A1) QUE INIBE A SÍNTESE PROTÉICA DA CÉLULA EUCARIÓTICA INATIVANDO CATALITICAMENTE A SUBUNIDADE RIBOSSOMIAL 60S - MORTE CELULAR.
•POSSUEM UM GENE CROMOSSOMIAL (eae) - ALTERAÇÕES DO CITOESQUELETO DAS CÉLULAS EPITELIAIS DA MUCOSA INTESTINAL, DESTRUINDO VILOSIDADES E ACÚMULO DE ACTINA NO LOCAL DA ADESÃO: AÇÃO DOS VASOS SANGUÍNEOS DAS MICROVILOSIDADES COM ELIMINAÇÃO DE SANGUE NAS FEZES.

EPIDEMIOLOGIA

•RESERVATÓRIOGADO BOVINO E OVINO
•SURTOS - HAMBURGUER, LEITE CRU, CIDRA E SUCO DE MAÇÃ NÃO PASTEURIZADO, SALAME CURADO DESIDRATADO, ALFACE, BATATAS, TERRAS FERTILIZADAS, BROTOS DE RABANETE, BROTOS DE ALFAFA, IOGURTE, SANDUÍCHES, ÁGUA.
•ISOLAMENTO ANIMAIS DOENTES OU SADIOS: EUA, CANADÁ, MÉXICO, AUSTRÁLIA, CHINA, JAPÃO, CORÉIA DO SUL, ÍNDIA, TAILÂNDIA, ISRAEL, ALEMANHA, ESCÓCIA, ARGENTINA.

TRATAMENTO

•MONITORAMENTO CUIDADOSO DOS PACIENTESCOMPLICAÇÕES SÃO COMUNS
•TRATAMENTO COM ANTIMICROBIANO É DESNECESSÁRIO
•TRATAMENTO COM COTRIMOXAZOLE PODE INDUZIR O DESENVOLVIMENTO DA SÍNDROME URÊMICA HEMOLÍTICA.

EaggEC (EAEC)

•CAUSA DIARRÉIA PERSISTENTE EM CRIANÇAS (PROTRAÍDA = CRÔNICA)
•NÃO SECRETAM ENTEROTOXINAS LT OU ST
•ADESÃO À MUCOSA INTESTINAL SENDO O MODELO DIFERENTE DE EHEC, EPEC OU EIEC
•ADESÃO NO COLÓN, MEDIADA POR FÍMBRIAS (CONJUNTO DE MICROFIBRILAS ASSOCIADAS EM FEIXES = BFB (“bundle forming pilus’) DIFERENTES DAS OUTRAS FÍMBRIAS DE ADESÃO.
•INTERFEREM NO METABOLISMO CELULAR DO ENTERÓCITO COM AÇÃO NA ABSORÇÃO DE SAIS E ELETRÓLITOS
•PRIMEIRA DESCRIÇÃO - DÉCADA DE 1980: SANTIAGO (CHILE) – DIARRÉIA EM CRIANÇAS
•1994 - REINO UNIDO – 133 PACIENTES - VÔMITO, DIARRÉIA, DIARRÉIA PERSISTENTE EM NÚMERO PEQUENO DE PACIENTES.
•SURTOS ASSOCIADOS COM CONSUMO DE REFEIÇÕES EM RESTAURANTES SEM UMA FONTE ÚNICA DE IMPLICAÇÃO.

PROCEDIMENTOS CONVENCIONAIS DE ISOLAMENTO

EIEC, ETEC, EPEC, EAEC

•CEPAS LACTOSE (+) – NÃO AFETADAS POR TEMPERATURAS ELEVADAS – NMP E. coli
•BACTERIOLOGICAL ANALYTICAL MANUAL’ (BAM) OF ‘FOOD AND DRUG ADMINISTRATION’(FDA) PARA ISOLAR CEPAS PATOGÊNICAS DE ALIMENTOS:
•25 GRAMAS OU mL AMOSTRA/ 225 mL CALDO INFUSÃO CÉREBRO CORAÇÃO/35ºC/3 h
•TRANSFERIR TODO PRÉ-ENRIQUECIMENTO PARA 250 mL DE CALDO TRIPTONA FOSFATO (TP) – 44ºC/20H (ENRIQUECIMENTO SELETIVO)
•ESTRIAR TP EM ÁGAR: EOSINA AZUL DE METILENO, MAcCONKEY - SELECIONAR 10 COLÔNIAS TÍPICAS E 10 COLÔNIAS ATÍPICAS - IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA, SOROLOGIA, VIRULÊNCIA
* PARA EIEC - USAR ÁGAR: HEKTOEN ENTERIC, MAcCONKEY, SALMONELLA/SHIGELLA - SÃO MENOS INIBIDORES E MAIS SENSÍVEIS PARA ISOLAR EIEC

EHEC 0157:H7 E OUTROS SOROTIPOS

•CARACTERÍSTICAS: SORBITOL(-), BETA GLUCURONIDASE (-), TETRAMETIL-UMBELIFERIL BETA DELTA GLUCURONIDE (MUG-).
•* O157:H- - PRODUZ Stx2, SORBITOL (+), MUG (+), HU - ALEMANHA PREVALENTE NA EUROPA CENTRAL.
•* CEPAS GENETICAMENTE PERTENCENTES AO GRUPO CLONAL 0157:H7 - SORBITOL(+), MUG(+) -USA

SORBITOL MAcCONKEY AGAR (SMAC)
 10G/90 mL ÁGUA PEPTONADA A 0,01% - 0,1mL - SMAC/350C - CINCO A DEZ UFC SORBITOL (-)SOROLOGIA - 0157(+), H7 (+) - FATOR DE VIRULÊNCIA

COLITE HEMORRÁGICA AGAR (HC)
 25 GRAMAS/225 mL CALDO INFUSÃO CÉREBRO CORAÇÃO/35ºC - SMAC OU HC/35ºC E 43ºC -CINCO A DEZ COLÔNIAS SORBITOL (-), MUG (-) - SOROLOGIA.



TELURITO CEFIXIMA SORBITOL MAcCONKEY AGAR (TC-SMAC)
•ALIMENTOS COM MUITA MICROBIOTA COMPETITIVA
•CALDO ENRIQUECIMENTO COM: VANCOMICINA, CEFIXIMA E CEFSULODINE PARA INIBIÇÃO DE GP, Aeroomonas spp., Proteus spp. TC-SMAC AGAR (INIBE CRESCIMENTO DE OUTRAS E.coli E OUTRAS BACTÉRIAS SORBITOL (-) - SOROLOGIA.

FDA METHOD - BAM - 0157:H7 DE ALIMENTOS

A)ENRIQUECIMENTO: 25 G OU 225 mL DE CALDO ENRIQUECIMENTO EHEC (“EEB’) – 37ºC COM AGITAÇÃO/6h - ESTRIAR 0,1 ML EM TC-SMAL; REINCUBAR A 37ºC AGITAÇÃO/ “OVERNIGHT” = 18 HORAS
B)ISOLAMENTO: ESTRIAR 0,1 mL SUB-CULTIVO 6h EM TC-SMAC, ESTRIAR UMA ALÇA NUMA SEGUNDA PLACA DE TC-SMAC - 37ºC/24H. SELECIONAR COLÔNIA CINZA COM CENTRO PRETO – 1-2mm DE DIÂMETRO – SORBITOL (-) E TÍPICAS DE O157:H7. REPICAR CINCO A DEZ COLÔNIAS EM ÁGAR TRIPTICASE SOJA COM 0,6% EXTRATO DE LEVEDURA (INCLINADO) - 37ºC/24H

NÃO CRESCIMENTO DE COLÔNIA TÍPICA DE 0157:H7 EM TC-SMAC - PLAQUEAR O CULTIVO ENRIQUECIMENTO “OVERNIGHT’ - 0,1mL E ESTRIAR COM ALÇA
“EEB”, “TC-SMAC” - INIBEM 0157:H7 EM BAIXOS NÍVEIS NO ALIMENTO

C)CONFIRMAÇÃO: RETIRAR COM AGULHA PEQUENA QUANTIDADE DA COLÔNIA CRESCIDA EM TSA - TESTAR REAÇÃO INDOL COM REATIVO DE KOVAC’S EM PAPEL FILTRO EMBEBIDO - ISOLAMENTO INDOL (+) - SOROLOGIA (ANTISORO 0157)PRESUNTIVO 0157:H7 -CONFIRMAÇÃO BIOQUÍMICA - “POLIMERASE CHAIN REACTION”(“PCR’) - REAÇÃO DE POLIMERASE EM CADEIA.


MÉTODOS RÁPIDOS
PCR – SONDA DNA – ELISA (“ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY’)...

FRANCO, R.M – 2002 – ISOLAMENTOS SUÍNO – SÃO GONÇALO – RJ - BRASIL•FERIDA DE SANGRIA - EPEC (2)
•COSTELA - AUSÊNCIA DE E.coli PATOGÊNICA
•PERNIL -EIEC (2)
•LINFONODOS - EPEC(6)
•FEZES - EPEC(4), EIEC(2), EHEC=0157:H-(1)

MEDIDAS PREVENTIVAS E CONTROLE

•APPCC PREVENIR CONTAMINAÇÃO FECAL NA PRODUÇÃO E PROCESSAMENTO, COCÇÃO ADEQUADA DAS CARNES (ACIMA DE 66ºC), NÃO CONSUMO ALIMENTOS CRUS, EVITAR CONTAMINAÇÃO CRUZADA, PROTEGER ALIMENTOS, INSPEÇÃO VETERINÁRIA, HIGIENE MANIPULADORES, SANEAMENTO BÁSICO, ÁGUA ABASTECIMENTO, LIMPEZA E DESINFECÇÃO (EQUIPAMENTOS, UTENSÍLIOS, INSTALAÇÕES), OCLUSÕES NO ABATE, REFRIGERAR ALIMENTOS APÓS MANIPULAÇÃO, ATMOSFERA CONTROLADA.
•EXCLUSÃO COMPETITIVA – BACTERIOCINAS
•VACINAÇÃO ANIMAL
•MEGA REGULAMENTO


PROF. DR. ROBSON MAIA FRANCO


OBRIGADO PELA ATENÇÃO!!!