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Prof. Dr. Robson Maia Franco

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IMPORTÂNCIA DA APLICAÇÃO DOS MÉTODOS MINIATURIZADOS NOS DIAGNÓSTICOS EM MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
Prof. Dr. Robson Maia Franco

Justifica-se a utilização das técnicas miniaturizadas, como mudanças operacionais nas técnicas laboratoriais para verificar a comparação dos métodos originais, tendo em vista que nos últimos 25 anos vem ocorrendo grande interesse pelos métodos microbiológicos que visem a redução de gastos na aplicação das técnicas analíticas laboratoriais, quer sejam clínicas ou alimentícias, desde que apresentem sensibilidade, especificidade e coeficiente global próprios da metodologia tradicional.
A redução de gastos está intimamente relacionada às dificuldades financeiras que as Universidades Brasileiras vêm passando, e a influência política na liberação dos recursos pelos órgãos financiadores de pesquisa, onde as bolsas são aprovadas com mérito e no, entanto, os poucos recursos financeiros, são liberados nem sempre de maneira democrática e deontológica.
Autoridades internacionais em microbiologia alimentícia industrial, têm desenvolvido trabalhos enfatizando métodos rápidos, miniaturizados e de automação para validação e aceitação internacional , tais como os descritos por: Fung; Cox (1981), Cox et al. (1984), Fung et al.(1984, 1988), Ligugnana; Fung (1990).
Nos trabalhos acima aludidos, as modificações inseridas nos métodos aplicados na indústria e comercialização de alimentos, são sumariadas em cinco categorias: aperfeiçoamento da amostragem e preparação das amostras, miniaturização dos procedimentos convencionais e desenvolvimento de “kits” para diagnósticos, modificações nos procedimentos de contagem de células viáveis, desenvolvimento de novos métodos para estimar a população microbiana e identificar microrganismos por instrumentos e métodos sofisticados.
A aplicação das técnicas miniaturizadas tem como objetivos aprimorar, economizar, racionalizar e verificar a funcionalidade dos métodos em pesquisas microbiológicas.
Na técnica de miniaturização sugerida, a quantidade dos meios de cultura para determinação do Número Mais Provável (NMP), deve ser de 1 mL ( 1000μL) ao invés de 10 mL e a inoculação de cada diluição será de 0,1 mL (100μL) e não de 1mL, economizando em dez vezes as quantidades de meios utilizados, reduzindo os custos. Porém, o tamanho da amostra e subamostras devem ser a mesma estabelecida pelos órgãos oficiais, para não ocorrerem resultados falsos negativos, considerando-se que a amostragem e preparo dos analitos não devem apresentar variação, tendo em vista a seletividade, a especificidade e o coeficiente global em procedimentos analíticos laboratoriais microbiológicos para alimentos.
Consideram-se ainda como fatores determinantes na economia financeira da técnica a redução: do gasto de água; de detergente neutro biodegradável; do tempo de lavagem de tubos de ensaio; de energia elétrica para esterilização de tubos, para secagem de vidrarias em estufa, para lavagem e preparo de homogeneizadores ao utilizar envelopes para homogeneização de amostras em “stomacher”.
A economia financeira do método de miniaturização é importante. Entretanto, a proporção entre a alíquota semeada e a solução diluente ou o meio de cultura deve permanecer constante (1:9) para não comprometer a eficiência do método. Em análise preliminares os resultados, quando comparados com a método tradicional, não apresentaram diferenças.
A tabela utilizada para o cálculo no NMP deve ser a mesma usada nas técnicas não miniaturizadas. Contudo, como os volumes dos inóculos foram dez vezes menores, cada valor encontrado na combinação de tubos positivos, tem que ser multiplicado por 10, para a correção devida.
Os meios de cultura e as soluções diluentes devem ser acondicionados e esterilizados em microtubos do tipo Eppendorf, tornando o procedimento técnico mais fácil, mais seguro e minimizando os riscos de manipulação.
O uso de ponteiras e pipetas automáticas automatiza a técnica, por reduzir o tempo no preparo das diluições e os riscos de acidentes em relação ao trabalho desenvolvido com a utilização de pipetas de vidro.
Tenho desenvolvido pesquisas utilizando o método miniaturizado na Enumerção de coliformes e Escherichia coli e Enumeração de Enterococcus spp., utilizando respectivamente, Caldo Fluorocult LMX ac. MANAFI e OSSMER e Caldo Chormocult Enterococci em amostras de: carne moída, aves, pescado, queijo e produtos lácteos. A aplicação da metodologia miniaturizada nos procedimentos analíticos bacteriológicos, nos diferentes tipos de amostras acima discrimadas, tem encontrado excelente aceitação por inúmeros pesquisadores e, com a participação dos meus orientados CNPQ-UFF, temos sido classificados em primeiro lugar e sempre entre os dez primeiros colocados na áreas de Ciência Agrárias na Semana Científica da UFF e Prêmio Vasconcellos Torres de Ciência e Tecnologia.
Prof. Dr. Robson Maia Franco
Prof. Associado II
Controle de Qualidade Microbiológica de Produtos de Origem Animal
Departamento de Tecnologia dos Alimentos
Faculdade de Veterinária
Universidade Federal Fluminense